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试管婴儿助孕,第一助孕网,食品微生物菌落总数测定注意事项
来源:http://www.053123.com  日期:2022-08-14

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菌落总数次要是作为剖断食物被细菌传染水平的标识表记标帜,也可以使用这一方式窥察食一中细菌的性子和细菌正在食物中繁衍的静态,以便对被检样品停止卫生学评估时供给科学依据。

一、菌落总数测定的几项解释

1.菌落总数的测定:

是以检样中的细菌细胞跟养分琼脂

培养基

或许平板计数琼脂或胰酪大豆胨琼脂培养基(依据磨练尺度要求取舍响应的培养基)混淆后,每一个细菌细胞皆能造成一个可见的零丁菌落的假设为根底的。因为磨练中采取37℃于有氧前提下培育(氛围中含氧约20%),因此并不克不及测出每g或mL检样中实际的总活菌数,厌氧菌、微嗜氧菌跟冷营菌正在此前提下没有发展,有特别养分要求的一些细菌也遭到了限定,是以所得成果,只包罗一群能正在平凡养分琼脂培养基中发育、嗜中温的、需氧跟兼性厌氧的细菌菌落的总数。

2.鉴于检样中的细菌细胞是以单个,成单、链状、葡萄状或成堆的情势存在,因此正在菌落总数测定培养基平板上呈现的菌落可以来源于细胞块,也可以来源于单个细胞,是以平板上所得需氧跟兼性厌氧菌菌落的数字没有应讲述活菌数,而应以单元重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单元数(colony forming units,CFU)讲述之。

3.每种细菌皆有它必然的心理特性,培育时,使用分歧的养分前提及其他心理前提(如温度、培育工夫、pH、需氧性子等)来知足其要求,才气离别将各类细菌皆培育出来。是以,要失掉较周全的细菌菌落总数,应将检样接种到几种分歧的非选择性培养基上,并培育正在分歧前提下,如温度,氧气供给等。

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两、菌落总数的测定

测定食物中菌落总数时,是将食物检样做成几个分歧的10倍递增稀释液,然后从各个稀释液中离别掏出一定量正在平皿内与菌落总数测定培养基相混淆,经培育后,按必然要求计较出皿内琼脂平板上所天生的细菌集落数,并再依据检样的浓缩倍数,计较出每g或mL样品中所含细菌菌落的总数。

三、菌落总数测定中的一些要求跟划定

为了精确天反应食物中各类需氧跟兼性厌氧菌存在的环境,磨练时必需遵守以下一些要求跟划定:

(一)所用器皿及稀释液:

1. 磨练中所用玻璃器皿,如培养皿,吸管、试管等必需是完整灭菌的,并正在灭菌前完全洗涤洁净,不得残留有抑菌物资。

2. 用作样品浓缩的液体,每批皆要有空白对照。若是正在琼脂对比平板上呈现几个菌落时,要追加对比平板,以剖断是空缺稀释液,用于倾注平皿的

培养基

,仍是平皿吸管或氛围能够存在的传染。

3. 检样的稀释液虽可用灭菌盐水或蒸馏水,但以用磷酸缓冲盐水特殊是0.1%卵白胨水为适合,果卵白胨火对细菌细胞有更好的护卫作用,不会由于正在浓缩进程中而使食物检样华夏已受毁伤的细菌细胞招致殒命。若是对含盐量较下的食物(如,酱品等)停止浓缩,则宣采取蒸馏水。

(两)检样浓缩:

1. 检样浓缩时,应以无菌手续称取(或量与)有代表性的样品25g(或mL)剪碎放于含有225ml灭菌稀释液的玻璃瓶内(瓶内预置得当数目的玻璃珠),经充足振摇作成l:10的稀释液。如系肉、鱼等固体样品,最好剪细于灭菌乳钵内与稀释液研匀,或与稀释液同置于灭菌均质器杯中(国产均质器,现阶段以江苏武进郑陆医学仪器厂产物较轻便而实用),以8000~10000rpm速率搅拌1分钟,使做成平均的1:10稀释液。

2. 依据食品卫生尺度要求或对标本传染环境的估量,将上述1:10的检样稀释液再做成几个得当的10倍递增稀释液。即取1:10稀释液1mL与9mL稀释液混跟做成l:100的稀释液,然后依次递增浓缩,做成1:1000、1:10000等稀释液。留神每递增浓缩一次,必需另换1支l mL灭菌吸管,如许所得检样的浓缩倍数圆为精确。

3. 从吸管筒内掏出灭菌吸管时,不要将吸管尖端碰到其他仍留在容器内的吸管的外露部门;并且吸管正在进出装有稀释液的玻璃瓶跟试管时,也不要触及瓶口及试管心的外侧部门;由于这些部门皆能够打仗过手或其他沾污物。

4. 正在作10倍递增浓缩中,吸管拔出检样稀释液内不克不及低于液砸2.5cm;吸入液体时,应先高于吸管刻度,然后提起吸管尖端离开液面,将尖端贴于玻璃瓶或试管的内壁使吸。管内液体调至所要求的刻度,如许取样较精确,并且正在吸管从稀释液内掏出时不会有过剩的液体粘附于管外。

5. 当用吸管将检样稀释液加至另一装有9mL空缺稀释液的试管内时,应当心沿管壁参加,不要触及管内稀释液,以防吸管尖端外侧部门粘附的检液也混入此中。

(三)平板接种与培育:

1. 将稀释液加至灭菌平皿内时,应依据食品卫生尺度要求或对标本传染环境的估量,取舍2~3个适宜浓缩度,离别正在作10倍递增浓缩的同时,即以汲取该浓缩度的吸管移lmL稀释液参加皿内(从皿侧参加,不要揭去皿盖),最初将吸管竖立使液体流毕,并正在皿底干燥处再擦一下吸管尖将余液排出,而不要吹出。每一个浓缩度应作2个平皿。

2. 用于倾注平皿的养分琼脂应预先加热使熔化,并保温于45±1℃恒温水浴中待用。倾注平皿时,每皿内倾入约15mL,最初将琼脂底部带有积淀的部门弃去。

3. 为了防备细菌增殖及发生片状菌落,正在检液参加平皿后,应正在20分钟外向皿内倾入琼脂,并立刻使其与琼脂混跟平均。

4. 检样与琼脂混和时,可将皿底正在立体上先向一个标的目的扭转,然后再向相反的标的目的扭转,以使充足混匀。扭转中应加当心,不要使混和物溅到皿边的上方。为了保障混跟平均,而没有溅及皿边的上方,可利用江苏省无锡县卫生防疫站童鹤泉计划制成的自动平皿扭转仪,间接将加有检样的平皿放在扭转仪上(可同时放4只平皿),参加琼脂后,开动电钮,正在数十秒钟内便可自动摆布扭转而使皿内的检样与琼脂混淆平均。

5. 皿内琼脂凝结后,不要久长安排,然后初翻转培育,而应于琼脂凝结后,正在数分钟内即应将平皿翻转予以培育,如许可制止菌落伸张发展。需要时,可先将皿翻开颠倒(皿底向上)于温箱内经15~60分钟使琼脂概况干燥后,再将皿底移至盖内倒置于温箱内培育。如许可以阻挠运动性强的变形杆菌属、假单胞菌属跟芽胞杆菌属中一些菌株正在琼脂概况扩展发展。

6. 为了节制传染,正在取样停止磨练的同时,于事情台上翻开一块琼脂平板,其裸露的工夫,应与该检样从制备、浓缩到参加平皿时所裸露的最长的工夫相称,然后与加有检样的平皿一并置于温箱内培育,以相识检样正在磨练操作过程中有l无遭到来自氛围的传染。

7. 培育温度:

应依据食物品种而定。肉、乳、蛋类食物用37℃培育,水产品用30℃培育。培育工夫为48±2小时。其他食物,如,清冷饮料,调味品,糖果、糕点.果脯,酒类(次要为发酵酒)、豆制品跟酱腌莱均系用37℃24±2小时培育。培育温度跟工夫之所以有这类分歧的划分,乃是由于正在拟定这些食品卫生尺度中对于菌落总数的划定时,离别采取了分歧的温度跟培育工夫所取得的数据之故。水产品果来自海水或海水,水底温度较低,因此拟定水产品细菌方面的卫生标准时,系用30℃作为培育的温度。

(四)对比实验:

1. 参加平皿内的检样稀释液(特殊是10:1的稀释液),有肘带有食物颗粒,正在这类环境下,为了制止与细菌菌落产生混合,可作一检样稀释液与琼脂混跟的平皿,没有经培育,而于4℃情况巾安排,以便正在计数捡样菌落时用作对比。

2. 为了防备检样中食物颗粒与菌落混合,也可正在已熔解而保温于45℃水浴内的琼脂中,按每100ml减lmL,0.5%氯化三苯四氮唑(2,3,5triphenyltetrazolium chloride,TTC)水溶液之量加入适量的TTC。培育后,如是食物颗粒,不见变更,如为细菌,则天生白色菌落,配好的TTC溶液,应先用来与不加TTC的作对比,以窥察其对计数是不是有晦气的作用(TTC正在必然浓度下对革兰氏阳性菌有抑制作用)。TTC溶液要放冷暗处保留,以防受热与光照而产生分化。无色的TTC是作为受氢体参加培养基中,若是有细菌存在,培育后,正在细菌脱氢酶的作用下,TTC便接管氢而成为白色的三苯基甲艏(formazan),使菌落显现白色。

(五)菌落计数:

1. 从温箱内掏出平皿停止菌落计数时,应先离别窥察统一浓缩度的两个平皿跟分歧浓缩度的几个平皿内平板上菌落发展环境。平行实验的2个平板与菌落数该当濒临,分歧浓缩度的几个平板上菌落数则应与检样浓缩倍数成反比,即检样浓缩倍数越大,菌落数越低,浓缩倍数越小,菌落数越下。

2. 计数菌落时,应拔取菌落数在30~300之间的平板作为菌落总数测定的尺度。1个浓缩度利用两个平板,应采取两个平板平均数;如此中一个平板有较大片状菌落发展时,则不宜采取,而应以无片状菌落发展的平板作为该浓缩度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落漫衍又很平均,便可计较半个平板后乘2以代表全皿菌落数。如正在一个浓缩度的两个平板中,一个平板的菌落数在30~300之间,另一个大于300或小于30时,则以菌落数在30~300间的平板作为计数的尺度。

3. 注意事项

(1)若是浓缩度大的平板上菌落数正比浓缩度小的平板上菌落数高,则系磨练事情中产生的过失,属实验室变乱。另外,也能够果抑菌剂混入样品中而至,均不成用作检样计数讲述的根据。

(2)若是平板上呈现链状菌落,菌落之间不较着的边界,那是正在琼脂与检样混淆时,一个细菌块被疏散所形成。一条链作为一个菌落计,如有起源分歧的几条链,每条链作为一个菌落计,不要把链上发展的各个菌落离开来数。另外,如皿内琼脂凝结后已实时停止培育而蒙受虫豸侵入,正在虫豸爬过的处所也会呈现链状菌落,也不该离开来数。

(3)若是一切平板上皆有菌落密布,不要用多不成计作讲述,而应正在浓缩度最大的平板上,随意率性数此中2cm2个,除2求出每cm2内均匀菌落数乘以皿底面积63.6cm2数,再乘其浓缩倍数作讲述。例如10-1~10-3浓缩度的一切平板上均菌落密布,而正在lO-3浓缩的平板上任数2个cm2。内的菌落数是60个,皿底直径为9cm,则该检样每g(或m1)中“估量”菌落数为:60/2×63.6×1000=1908000或1.9×106。

63.6cm2数系按皿底直径为9cm时计较而得,即:(9/2)2×3.14=63.6;如所用平皿的皿底直径不是9cm,则可按其直径的实际cm数代人圆面积公式供出。

(4)菌落计数中,如能利用国产JLQ-S。型菌落计数器,则比力便利,灯光由正面射向平板,菌落容易窥察。因为仪器带有电子音响讯号,用特制金属探笔点数中,正在收回音响之下初显现数字增长,不会产生过失。且灯光与平板之间夹有多用方格玻质规板(方格面积为lcm2),也有助于对菌落密布的平板停止计数。

(5)检样如系微生物类制剂(如酸牛乳、酵母制酸性饮料),则平板计数中应响应天将有关微生物(乳酸杆菌、酵母菌)消除,不成并入检样的菌落总数内作讲述。普通正在校订检样的pH7.6后,再停止浓缩跟培育,此类嗜酸性微生物常常即不容易发展。并可用革兰氏法染色判别。染色判别时,要用没有校订pH的检样做成不异浓缩度的稀释液培育所天生的菌落涂片染色作对比,以资鉴识。酵母菌卵圆形,远比细菌年夜,巨细为2~5×5~30μm,革兰氏阳性着色。乳酸杆菌正在24小时内,于平凡养分琼脂平板上正在有氧前提下培育,平常是没有发展的。

(六)讲述方法

1. 菌落数小于100CFU 时按“四舍五入”准则修约以整数讲述。菌落数大于或即是100CFU 时第3位数字采取“四舍五入”准则修约后取前2位数字前面用0取代位数;也可用10的指数情势去默示按“四舍五入”准则修约后采取两位有效数字。若一切平板上为伸张菌落而没法计数则讲述菌落伸张。若空白对照上有菌落发展则此次检测成果有效。

2. 检样为固体,用重量法取样磨练时,以g为单元讲述其菌落数;检样为液体,用容量法取样磨练时,以mL为单元讲述其菌落数;如检样为样品概况的涂擦液,则应以cm2为单元讲述其菌落数。

3. 如检样为液体,正在两个平皿内所加lmL未经浓缩的检样(原液)培育中,均无细菌集落天生,则讲述为lmL检样内未有菌落发展,或1mL检样内菌落数1。

四、特别的方式

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(一)平板概况涂布法

将养分琼脂制成平板,经50℃,l-2小时或35℃,18-20小时干燥后,于其上滴加检样稀释液0.2mL,用L捧涂布于全部平板的概况,安排半晌(约10分钟),将平板翻转,移至36±1℃温箱内培育24±2小时(水产品用30℃培育48±2小时),掏出,按前述方法停止菌落计数,然后乘以5(由0.2mL换算为1mL),再乘以样品浓缩的倍数,即得每g或mL检样所露菌落数。

此法较上述倾注法为劣,果菌落发展正在概况,便于辨认跟搜检其形态,虽检样中带有食物颗粒也不会产生混合,同时借可使细菌没必要蒙受熔化琼脂的热力,不致是以而使菌细胞遭到毁伤而没有发展,从而可制止因为磨练操纵中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低。可是本法取样量较倾注法为少(仅倾注法的五分之一),代表性将遭到必然的影响。

(两)平板概况点滴法

与涂布法类似,所分歧者,只是用标定好的微量吸管或注射器针头按滴(使每滴相当于0.025mi)将检样浓缩液滴减于琼脂平板上流动的区域(预先正在平板后头用标识表记标帜笔画成四个区域),每一个区域滴1滴,每一个浓缩度滴两个区域,作为平行实验。滴加后,将平板放平半晌(约5~10分钟),然后翻转平板,如前移入温箱内培育6~8小时后停止计数,将所得菌落数乘以40(由0.025mL换算为1mL),再乘以样品浓缩的倍数,即得每g或mL检样所露菌落数。

李嘉欣颜值很下,可儿子的颜值却跟爸爸高度类似,并不遗传到妈妈的优点,不外,别看李嘉欣儿子年数比力小,但从小便得才兼备,学习成绩十分好,也算是遗传了伉俪的高智商。

试管婴儿本身便不是百分之百的胜利,而且也不如天然受孕,以是有必然的差异也是很畸形的,可是那也没有影响父母亲对他的爱。

我以为也比力畸形,由于李嘉欣其实太美了,若是儿子能完整继续她的长相,那么相对是顶级流量明星。

这个很畸形的,孩子的模样虽然跟基因也关联,可是也跟后天生涯的情况有关联的,咱们对待一个人,没有该当只存眷他是不是颜值下,更要看一个人的内涵,愿望孩子可能安康欢愉的生长,不要卷入那些黑白中。

我以为很惋惜,由于李嘉欣长得很悦目,这么优异的基因不经由过程昆裔保留上去很惋惜

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